Filtrado de aire en puertos autosellantes
En esta entrada vamos a resolver uno de los problemas más frecuentes a la hora de absorber diferentes líquidos de un recipiente cerrado a través de un puerto autosellante (generalmente de silicona), ya sea agua esterilizada, soluciones de esporas, inoculantes o culturas líquidas de micelio.
A la hora de absorber con una aguja y jeringa cualquier líquido de un recipiente cerrado (por ejemplo una botella o recipiente de vidrio), aparece el problema de diferencias de presión entre el interior del recipiente y el ambiente exterior. Si absorbemos con una jeringa, la presión del interior del recipiente será siempre menor que la ambiental exterior, por lo tanto al sacar la aguja del puerto de inoculación o al introducir una nueva aguja a través de él, el recipiente tratará de absorber aire del exterior para estabilizar su presión interna. La más mínima cantidad de aire de entre en el recipiente a través de las punciones realizadas en su puerto autosellante puede contaminar la solución de su interior, arruinando el medio y siendo un potencial vector de contaminación para nuestros sustratos y/o Spawn (o grano esterilizado y colonizado).
Para solucionar este problema usaremos un filtro de jeringa tipo Whatman acoplado a una aguja de cierto grosor (al menos de 18 gauges). Este filtro no deja de ser una cápsula de plástico con un pequeñísimo y compacto filtro de entre 0,2 y 0,45 micras y conexión tipo Luer con jeringas y agujas. Recomendamos usar el filtro con el menor tamaño posible de poros, preferiblemente el de 0,2 micras, y que sea de material esterilizable (es decir, de PTFE preferiblemente, ya que este material aguanta perfectamente los 121 ºC que se alcanza en el interior de un autoclave u olla express). Es muy curioso, pero el pequeño tamaño de sus poros permite esterilizar el líquido (o aire/gas) que pase a través de su membrana filtrante, y por eso se usa muchísimo en la industria farmacéutica y en diferentes laboratorios de todo tipo.
En nuestro caso lo acoplaremos a una jeringa con el grosor indicado, la cual calentaremos con una llama al rojo vivo y atravesaremos con ella un extremo del puerto autosellante del recipiente que queramos utilizar, dejándolo allí colocado sin taponar su orificio externo. A continuación utilizaremos la jeringa con la que queramos absorber el medio líquido del interior del recipiente, y pincharemos su aguja (previamente llevada también al rojo vivo) a través de otro punto del mismo puerto autosellante. Al absorber dicho medio se producirá una reducción de la presión en el interior del recipiente que provocará la entrada de aire exterior a través del filtro Whatman conectado al puerto para equilibrar dicha presión con la exterior ambiental. Y este aire entrará totalmente estéril al haber pasado por dicho filtro. Pasados unos segundos podremos sacar lentamente la aguja de la jeringa con el medio líquido en su interior y sin problemas de absorción de contaminantes.